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PIERCE超敏型发光液使用方法简单说说
浏览次数:107发布日期:2022-06-22
  PIERCE超敏型发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。
 
  采用*的发光底物系统,降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂,大大提高试剂盒的稳定性,使其在室温能稳定放置一年。除用于X光片,还可直接使用荧光CCD扫描,主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。
 
  PIERCE超敏型发光液使用方法:
 
  1.常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-HRP夹法。核酸杂交膜用HRP标记探针杂交,洗膜。
 
  2.洗涤膜上的HRP标记二抗时,配制新鲜发光工作液:分别取等体积的溶液A和B混合,放置使之升到室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
 
  3.用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2膜)充分接触。室温孵育1分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利于反应进行,也会导致膜上条带曝光不均,明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
 
  4.用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
 
  5.在X光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹杂交膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。
 
  6.在黑暗中放入X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
 
  PIERCE超敏型发光液注意事项:
 
  1.步骤1-5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
 
  2.长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
 
  3.发光工作液孵育约1分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。
 
  4.由于PIERCE超敏型发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000-1:4000,二抗1:2000-1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败!
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